菌种保存的方法有哪些,菌种传代操作规程


菌种保存的方法有哪些,菌种传代操作规程

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回答菌种保存的方法有斜面低温保藏法、液体石蜡覆盖保藏法、沙土保藏法、滤纸保藏法、甘油管保存法、冷冻干燥保存法 。1、斜面低温保藏法:将菌种接种到适合的固体斜面培养基上 , 用油纸将棉塞部分包扎好 , 然后转移至2-8℃的冰箱中进行保存 。2、液体石蜡覆盖保藏法:使用液体石蜡将斜面菌覆盖住 , 使其和空气隔绝 。
一、菌种保存的方法有哪些
1、斜面低温保藏法
(1)将菌种接种到适合的固体斜面培养基上 , 等到菌种充分生长过后 , 使用油纸将棉塞部分包扎好 , 然后转移至2-8℃的冰箱中进行保存 。
(2)如果是霉菌、放线菌及有芽孢的细菌 , 一般可以保存2-4个月左右 , 需要移种一次 。如果是酵母菌 , 一般可以保存2个月左右 , 需要每个月移种一次 。
2、液体石蜡覆盖保藏法
(1)将液体石蜡装在三角烧瓶中 , 并使用棉塞塞好 , 用牛皮纸进行包扎 , 然后在0.1MPa , 121.3℃的环境下灭菌30分钟左右 , 接着将其放置在40℃的温箱之中 , 将水汽蒸发掉 。
(2)将需要保藏的菌种 , 用适合的斜面培养基进行培养 , 得到健壮的孢子或者是菌体 。
(3)使用灭菌过的吸管将液体石蜡吸出 , 注入斜面上 , 用量为高出斜面顶端1cm左右为宜 。
(4)将试管直立 , 放置在低温或者是室温之下进行保存 。
(5)霉菌、放线菌、芽孢细菌可以保藏2年以上不死 , 酵母菌可以保藏1-2年 , 一般无芽孢细菌可以保藏1年 , 脑膜炎球菌可以保藏3个月左右(37℃环境下) 。
3、沙土保藏法
(1)准备好河沙 , 加入10%稀盐酸 , 然后加热煮沸30分钟左右 , 将里面的有机质去掉 , 然后将酸水倒掉 , 用自来冲洗至ph为中性 , 接着烘干 , 过筛(40目筛子) , 去掉粗颗粒 。
(2)准备好非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土 , 浸泡洗涤数次 , 直至ph为中性 , 然后烘干 , 碾碎 , 过筛(100目筛子) , 去掉粗颗粒 。
(3)将沙和土按照2:1的比例混合 , 装入试管或者是安瓿管中 , 塞好棉塞 , 在1212℃的环境下灭菌30分钟左右 。
(4)将菌种在斜面培养基中培养 , 得到健壮的菌体 , 然后向斜面培养物中注入3-5ml无菌水 , 洗下细胞或孢子制成菌悬液 。
(5)使用灭菌过的吸管吸取菌悬液 , 然后均匀滴入沙土管中(0.2-0.5ml/管) 。如果是放线菌或霉菌 , 可以直接挑取孢子拌入沙土管中 。
(6)真空抽去沙土管中的水分 。
(7)将沙土管用火焰熔封 , 然后存放在低温(4-6℃)干燥处保藏 , 或者是将沙土管用牛皮纸或塑料纸包好 , 放置在干燥器内保存 。保存期间 , 每隔6个月左右检查一次菌种存活性 。
4、滤纸保藏法
(1)准备好滤纸条(0.5×1.2cm) , 安瓿管(0.6×8cm) , 然后每个安瓿管放置1-2张滤纸条 , 塞上棉塞 , 在0.1MPa , 121℃的环境下灭菌30分钟左右 。
(2)将菌种在适合的斜面培养基上培养 , 得到健壮的菌体 。
(3)在灭菌培养皿中滴加1-2ml的灭菌脱脂牛乳 , 并取数环菌苔在牛乳内混合均匀 , 制成浓悬液 , 然后使用镊子从安瓿管中取出滤纸条 , 浸入菌悬液中 , 吸饱后 , 放回安瓿管中 , 塞上棉塞 。

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